华体会原代培养的“生存指南”：从组织消化到功能维持的关键技术

　　华体会的成功原代培养，是研究肝纤维化机制与药物筛选的核心技术。这份“生存指南”将助您闯过从组织到功能细胞的重重关卡。

　　第一关：温和消化，高效分离

　　获取健康、有活性细胞的基石在于温和而高效的消化流程。传统的单酶消化易导致细胞团块和活性损伤。推荐采用胶原酶IV与DNA酶联用的灌注消化法。胶原酶特异性分解肝组织中的胶原网络，而DNA酶能有效降解死亡细胞释放的DNA，极大减少细胞团粘附，从而显著提高HSC的得率与纯度。

　　第二关：精准“捕捞”，提升纯度

　　消化后的细胞悬液是多种细胞的混合体。利用HSC固有的脂滴特性（富含维生素A）进行密度梯度离心（如Nycodenz梯度离心）是关键一步。此方法能像精准的“渔网”，将密度较低的HSC与其他肝实质细胞分离开，为后续实验提供高纯度的细胞群体。

　　第三关：抑制“叛变”，维持静息表型

　　原代HSC在体外培养中会自发“激活”，从富含脂滴的静息态转变为增殖旺盛的肌成纤维细胞，这是功能丧失的标志。为延缓此过程：

　　培养基选择：使用专为HSC设计的无血清培养基或优化配方，避免血清中未知促激活因子。

　　关键添加剂：在培养基中添加全反式维甲酸（ATRA）等物质，有助于维持细胞内维生素A储存和静息表型。

　　培养基底：在软质基底（如Matrigel）上培养，能通过力学信号传递，有效抑制细胞的活化进程。

　　结语

　　掌握这三大关键技术——温和消化、精准纯化与表型维稳，方能成功培养出状态良好、功能可靠的HSC，为揭开肝纤维化逆转的奥秘奠定坚实基础。